1、实 验 十 细菌生化实验,一、实验目的 1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 3、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5、了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。,二、实验原理,1、微生物对生物大分子的分解利用,淀粉水解：淀粉酶 油脂水解：脂肪酶 明胶液化：蛋白酶 石蕊牛乳试验：产酸、产碱、胨化、酸凝固等。,2、糖发酵试验,产酸：溴甲酚紫指示剂 大肠杆菌： 产气肠杆菌： 产气：杜氏小管检测 大肠杆菌： 产气肠杆菌：,3、
2、IMViC试验,IMViC试验,吲哚试验： 甲基红试验（M.R.试验）： 伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验）： 柠檬酸盐试验：,色氨酸酶：色氨酸吲哚对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚（红色） 大肠杆菌： 产气肠杆菌：,产酸能力：强，甲基红变红；弱：甲基红不变色 大肠杆菌：阳性 产气肠杆菌：阴性,葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇2,3-丁二醇 乙酰甲基甲醇OH二乙酰精氨酸的胍基红色化合物 大肠杆菌：阳性 产气肠杆菌：阴性,能否利用柠檬酸作为碳源 大肠杆菌：阴性 产气肠杆菌：阳性,三、实验材料,1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa），普通变形杆菌
3、（Proteus vularis），产气肠杆菌。 2、培养基：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基试管，石蕊牛奶试管，尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支，普通变形杆菌（内装有倒置的德汉氏小管） ，蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基，醋酸铅培养基。 3、溶液或试剂：革兰氏染色用卢氏碘液（Lugols iodine solution），甲基红指示剂，40% KOH，5% -萘酚，乙醚，吲哚试剂等。 4、仪器或其他用具：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架。,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验,淀粉水解试验,培养基：淀粉培养基平板 菌
4、种：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 方法：平板上划“十”字接种 注意：接种前在平板底部作记号；“十”字不要太大,油脂水解试验,培养基：油脂培养基平板 菌种：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 方法：平板上划折线接种 注意：接种前在平板底部作记号,明胶液化试验,培养基：试管明胶培养基 菌种：大肠杆菌或 产气肠杆菌 方法：穿刺接种 注意：20培养,石蕊牛乳试验,培养基：试管石蕊牛乳培养基（2支） 菌种：粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌 方法：斜面划线接种 注意：观察结构注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化现象是连续出现的。,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验 2、糖发酵试验,培养基：葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基（内装杜
5、氏小管）（各3支） 菌种：大肠杆菌和产气肠杆菌 方法：分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基,四、实验步骤,1、细菌水解大分子物质试验 2、糖发酵试验 3、IMViC试验,IMViC试验,五、实验报告,1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“”表示阳性，“”表示阴性。 2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气，“”表示不产酸或不产气。 3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果，以“+”表示阳性反应。“”表示阴性反应。 4、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？,五、实验报告,5、假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现什么结果？ 6、为什么大肠杆菌的甲基红反应阳性，而产气肠杆菌为阴性？这个试验与伏普试验最初底物与最终产物有何异同之处？ 7、说明在硫化氢试验中醋酸铅的作用，可以用哪种化合物代替醋酸铅？,
