1、考马斯亮蓝 G-250 与 R-250 的区别整理至网络SDS-PAGE 实验应该用 R250考马斯亮蓝有 G250 和 R250 两种，在颜色索引（Colour Index）中给出了不同的编号（42655 和 42660）。亮蓝 G 和亮蓝 R 在冷水中分别为微溶和不溶，在热水和乙醇中分别为可溶和微溶。两种染料均能对固定的蛋白进行有效地染色，使用浓度为溶于甲醇:冰醋酸:水（50:10:40）的 0.05%溶液。考马斯亮蓝 G250 与蛋白质的结合反应十分迅速，是常用的蛋白染料，染色后为蓝绿色，常用来作为蛋白质含量的定量测定。考马斯亮蓝 R250 与蛋白质结合虽然比较缓慢，但是染料可以穿透凝胶
2、，染胶效果好，染色后为红蓝色，且可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。G250 也可染胶，但染色过程慢且染色后背景高，脱色困难。图为 G250 分子结构式，除去红色显示的两个甲基即为 R250 分子结构考马斯亮蓝 R250（Coomassie brilliant blue R-250）为三苯基甲烷(triphenylmethane)，每个分子含有两个 SO3-H 基团，本身偏酸性，磺酸基与蛋白质的碱性基团结合形成染料-蛋白质复合物。MW=824，max=560-590nm。考马斯亮蓝 R-250 是通过范德瓦尔键与蛋白质结合，尤其适用于 SDS 电泳微量蛋白质染色，染色灵敏度比氨基黑高
3、5 倍。它与不同蛋白质结合呈现出基本相同的颜色，并且在比较宽的范围内（15-20g），扫描峰的面积与蛋白量呈线性关系。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合 Beer 定律，用作定量分析时要注意这点。 考马斯亮蓝 G250（Coomassie brilliant blue G-250）为二甲花青亮蓝(xylene cyanine brilliant blue)，是一种甲基取代的三苯基甲烷。比考马斯亮蓝 R250 多二个甲基，MW=854；max=590-610nm，游离状态下呈红色。染色灵敏度不如 R250，但比氨基黑高 3 倍。其优点在于它在三氯乙酸中不溶而以胶体形式存在，能选
4、择性地和蛋白质形成复合物，染色迅速，着色深的蛋白质区带在数秒内即可显现出来，约 45 分钟后着色最深，本底低，重复性好，适用于定量分析。考马斯亮蓝 G-250 测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝 G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝 G-250 结合在 2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下 1h 内保持稳定。该法是 1976 年 Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比 Lowry法还高 4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为 01,000g/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
